芦丁对植物病原菌抑制作用及稳定性研究
作者：盛 任 王应玲 陈永山 等
来源：《农业开发与装备》 2018年第4期
摘要：为研究芦丁成为生物制剂的可能，本试验研究芦丁对植物病原菌进行抑菌试验。试验表明芦丁对人参立枯病原菌、紫菀根腐病原菌、玉米大斑病原菌抑制效果最好的浓度为100倍稀释倍数，对白鲜皮大斑病原菌抑制效果最好的浓度为200倍稀释倍数。使用时不宜高温和含淀粉的药品同时使用，应避光保存。
关键词：芦丁；抑制作用；稳定性
0 引言
据统计，我国目前发现的大田作物病害约有70%是由作物病原真菌引起的。目前，防治植物病害主要依靠化学药品，长期使用化学农药，抗药性强，残毒大，污染严重。生物农药具有
来源广泛，毒副作用少，无污染，残留物质量低等优点。对环保和生态平衡具有十分重要意义。
资料显示，使用中药的芦丁提取物有一定的抑菌效果，芦丁属黄酮类化合物，为天然产物的有效成分，有抗氧化和抗菌作用等。故本实验就是采取天然产物来源的中药标品——芦丁。研究芦丁生物制剂在不同浓度下对病原菌是否有抑制作用及抑制作用大小，找出最适生物制剂及浓度，为芦丁生物防治应用的进行进一步实验。
1 材料与方法
1.1 材料
1）供实验的病原菌：人参立枯，白鲜皮大斑，紫菀根腐，玉米大斑（植物科学学院植物病理实验室提供各种植物病原菌）。
2）芦丁标品1g（本草天工科技有限公司，中国固剂制造技术国家工程研究中心。纯度≥98%）。
3）PDA培养基。
1.2 方法
1.2.1 抑菌实验
1）试验菌的培养：用接种环分别挑取人参立枯，白鲜皮大斑，玉米大斑，紫菀根腐斜面培养物一枚，转移到PDA培养基中，是菌种活化。
2）分别配置不同浓度药剂。每种药剂设置五个浓度，三次重复。浓度为50倍，100倍，200倍，400倍，800倍稀释液。
3）带药培养基的配置。
4）将已经培养好的菌落用打孔器沿菌落边缘打菌饼，使用接种针挑取菌饼至单药培养基中，于25℃下无光照恒温培养。
5）3天后取出平板，用十字交叉法测量菌落生长直径，共测2次。
1.2.2 芦丁稳定性的测定
1）热稳定性的测定：取8支洁净试管，取5mL标品溶液，在室温、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃水浴条件下保温30min，冷却至室温，测吸光度。
2）光照稳定性的测定：取若干洁净试管，每支试管中加5mL标品溶液，密闭但在自然光照射下放置，于0h、8h、16h、24h及32h时，测定吸光度值。
3）空气稳定性的测定：取若干洁净试管，每支试管中加5mL标品溶液，将各试管置于避光空气环境中，均在0h、8h、16h、24h及30h时，测定吸光度。
4）碳水化合物稳定性的测定：取若干洁净小烧杯分别向每个小烧杯中移30mL蒸馏水，分别各取葡萄糖、蔗糖、淀粉150mg置于小烧杯中，常温下，淀粉不溶解，加热促使淀粉溶解，取出冷却至常温，再分别向各溶液中添加10mL芦丁和小檗碱标品溶液，测定吸光度。
2 结果与分析
2.1 芦丁对病原菌菌落的影响
表1是试验期间芦丁处理后病原菌菌落直径，处理后的各病原菌菌落直径均小于未处理的菌落。人参立枯病原菌分别在50倍、100倍、200倍、400倍、800倍稀释液抑菌率分别是
17.53%、29.27%、23.83%、19.82%、22.39%；白鲜皮大斑病原菌分别在50倍、100倍、200倍、400倍、800倍稀释液抑菌率分别是25.35%、23.71%、29.81%、26.76%、24.41%；紫菀根腐病原菌分别在50倍、100倍、200倍、400倍、800倍稀释液抑菌率分别是13.93%、22.97%、17.49%、11.46%、14.47%；玉米大斑病原菌分别在50倍、100倍、200倍、400倍、800倍稀释液抑菌率分别是16.67%、18.75%、17.97%、13.28%、8.59%。以上各组处理与对照相比均达到差异显著水平。
芦丁对人参立枯病原菌、紫菀根腐病原菌、玉米大斑病原菌抑制效果最好的浓度为100倍稀释倍数，对白鲜皮大斑病原菌抑制效果最好的浓度为200倍稀释倍数。
表1 试验期间芦丁处理后病原菌菌落直径（cm）
2 2 小檗碱及芦丁稳定性测定
图1温度对芦丁稳定性的影响
图2光照时间对芦丁稳定性的影响
图3空气对芦丁稳定性的影响
图4糖类对芦丁稳定性的影响
图1，温度高于40℃时芦丁的吸光度值明显发生变化，说明芦丁的适宜温度不宜超过40℃，否则可能影响其抑菌效果。
图2，光照8h内，芦丁的吸光度值明显发生变化，说明芦丁应避光保存，长时间阳光照射可能影响其抑菌效果。
图3，暴露在空气中时，芦丁的吸光度值变化不大，说明空气对其稳定性没有太大影响。
图4，芦丁在分别加入葡萄糖、蔗糖、淀粉后吸光度值变化明显，说明葡萄糖、蔗糖淀粉影响其稳定性。
3 结论与讨论
本试验结果表明，芦丁对人参立枯病原菌、紫菀根腐病原菌、玉米大斑病原菌抑制效果最好的浓度为100倍稀释倍数，对白鲜皮大斑病原菌抑制效果最好的浓度为200倍稀释倍数。使用时不宜高温和含淀粉的药品同时使用，应避光保存。
本试验在实验室条件下完成，有一定的局限性和不足，具体运用到生产实践中去的效果有待进一步研究。
参考文献
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