中日友好医院学报２０１２年第２６卷第２期Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＣｈｉｎａ－Ｊａｐａｎ Ｆｒｉｅｎｄｓｈｉｐ Ｈｏｓｐｉｔｌ，ａ２０１２ Ａｐｒ，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．２ ９３ 甘草酸对糖尿病大鼠肾脏 氧化应激及醛糖还原酶水平的影响 丁颖超 ，刘长山 ，李萍 ，王秀军２刘慧 ，柳林２孙丽萍 （１．潍坊医学院研究生部，山东潍坊２６１０５３；２．山东省潍坊市人民医院内分泌科，山东潍坊２６１０４１） 摘要 目的：观察甘草酸对糖尿病大鼠肾脏氧化应激及醛糖还原酶活性、基因表达水平的影响，探讨其保护肾 脏、预防糖尿病。肾病的可能机制。方法：雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠３０只，随机分为正常对照组、模型对照组和甘草酸治疗 组，腹腔注射链脲菌素（６０ｍｇ／ｋｇ）诱导糖尿病模型，治疗组给予甘草酸（３０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）治疗１６周。１６周后测定各组 大鼠２４ｈ尿白蛋白量（ＵＰ２４）、肾脏肥大指数（肾重／体重）、丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、醛糖还原酶 （ＡＲ）活性及ｍＲＮＡ水平。结果：与正常对照组相比，模型组大鼠ＵＰ２４、肾指数显著升高（Ｐ＜０．０１），血清ＳＯＤ活 性降低．ＭＤＡ含量增加（Ｐ＜０．Ｏ１），肾脏ＡＲ活性及基因表达显著升高（Ｐ＜０．ｏ１）。与模型组相比，甘草酸治疗组 ＵＰ２４、肾指数显著降低（Ｐ＜０．０１），血清ＳＯＤ活性显著增强（Ｐ＜Ｏ．０５），同时ＭＤＡ含量显著减少（Ｐ＜０．０１），肾脏 ＡＲ活性显著降低、ＡＲｍＲＮＡ水平显著下降（均Ｐ＜０．ｏ１）。结论：高血糖可诱导机体氧化应激增强、多元醇代谢途 径激活及两者的协同效应，促进糖尿病肾病的发生发展；甘草酸可能通过抗氧化应激、减少肾脏ＡＲ活性及基 因表达以抑制多元醇通路的激活，发挥肾脏保护作用。 关键词：甘草酸；糖尿病肾病；氧化应激；醛糖还原酶；多元醇代谢途径 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１—００２５（２０１２）０２—００９３—０４ 中图分类号：Ｒ５８９．１ ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００ｌ一００２５．２０１２．０２．００９ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｏｎ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ａｌｄｏｓｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ／／ ＤＩＮＧ Ｙｉｎｇ－ｃｈａｏ，ＬＩＵ Ｃｈａｎｇ－ｓｈａｎ，ＬＩ Ｐｉｎｇ，ｅｔ ａｉ／／Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎａ－Ｊａｐａｎ Ｆｒｉｅｎｄｓｈｉｐ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，２０１２ Ａｐｒ，２６（２）：９３—９６ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｏｎ ｒｅｎａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ（ＤＮ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｉｒｔｙ ｍａｌｅ Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｇｒｏｕｐ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ ｗａｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ（６０ｍｇ／ｋｇ）．Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｗａｓ ｇｉｖｅｎ ｔｏ ｒａｔｓ ｉｎ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｇｒｏｕｐ ｆｏｒ １６ ｗｅｅｋｓ（３０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）．Ｔｈｅ ｕｒｉ— ｎａｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ２４一ｈｏｕｒ（ＵＰ２４），ｋｉｄｎｅｙ ｈｙｐｅ￣ｒｏｐｈｙ（ｋｉｄｎｅｙ ｗｅｉｇｈｔ／ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ），ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ）ａｃｔｉｖ— ｉｔｙ，ｍａ１０ｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ）ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｓｅｒｕｍ，ａｌｄｏｓｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＡＲ）ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ＡＲｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｋｉｄｎｅｙ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｒｅｓｕｌｓ：ＵＰ２４，ｋｉｔｄｎｅｙ ｈｙｐｅ￣ｒｏｐｈｙ，ｓｅｒｎｍ ＭＤＡ ｃｏｎｔｅｎｔ，ｋｉｄｎｅｙ ＡＲ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｉｌｅ ｓｅＩｕｍ ＳＯＤ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．Ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｆｏｒ １６ ｗｅｅｋｓ，ＵＰ２４，ｋｉｄｎｅｙ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ，ｓｅｒｕｍ ＭＤＡ ｃｏｎｔｅｎｔ， ｋｉｄｎｅｙ ＡＲ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）ａｎｄ ｓｅｌａｌｍ ＳＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５） ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ ｃａｎ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ ｂｙ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ，ｐｏｌｙｏｌ ｐａｔｈｗａｙ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｓｙｎｅｒｇｙ ｅｆｆｅｃｔｓ．Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｃｏｕｌｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ ｒｅｎａｌ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｏｌ ｐａｔｈｗａｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ；ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ；ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ；ａｌｄｏｓｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ；ｐｏｙｏｌ ｐａｔｈｗａｙ Ａｕｔｈｏｒ’Ｓ ａｄｄｒｅｓｓ Ｇｒａｄｕａｔｅ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｗｅｉｆａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｉｆａｎｇ ２６１０５３，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ 糖尿病肾病（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ，ＤＮ）的发 ２ 本文通讯作者。 作者简介：丁颖超（１９８３一），女，医学硕士。 收稿日期：２０１２—０２—１５修回日期：２０１２—０３～０９ 生、发展和严重程度与血糖升高程度及持续时间 密切相关¨ｌＪ，高血糖导致的醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅ ｒｅ． ｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ）活性升高、氧化应激增强是ＤＮ的重 要发病机制，但ＡＲ是否参与了氧化应激作用目 ９４ 中日友好医院学报２０１２年第２６卷第２期Ｊ前尚无定论，ＡＲ活性与氧化应激的关系是目前 研究的热点。本研究在制备糖尿病大鼠肾损伤模 型的基础上，观察肾脏ＡＲ活性及其基因表达与 氧化应激水平的关系，并予以中药甘草酸干预治 疗，观察甘草酸对糖尿病肾损伤大鼠肾功能的保 护作用，并从多元醇通路及氧化应激方面探讨甘 草酸抗糖尿病大鼠肾损伤、保护肾功能的作用机 制，为临床防治ＤＮ提供实验依据。 １材料与方法 １．１实验动物 健康雄性６周龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠．体重１８０～ ２００ｇ，由山东大学实验动物中心提供。 １．２试剂及仪器设备 链脲佐菌素（ＳＴＺ）购自美国Ａｌｅｘｉ公司。甘草 酸购白南京正大天晴制药公司。ＤＬ一甘油醛购自 美国Ｓｉｇｍａ公司。ＮＡＤＰＨ购自美国Ｒｏｃｈｅ公司。 ＵＶ一２６０型分光光度计，日本岛津公司。 １．３动物分组与处理 适应性喂养大鼠１周后，随机取ｌ０只作为正 常对照组喂养常规饲料，其余２０只拟作为糖尿病 观察组。于左下腹腔按６０ｍｇ／ｋｇ体重注射ＳＴＺ溶 液（溶解于０．１ｍｍｏｌ／Ｌ ｐＨ４．４枸橼酸钠一枸橼酸缓 冲液，稀释至０．５％浓度，冰盒中新鲜配制），注射 后７２ｈ断尾用罗氏血糖仪测血糖，血糖≥ １６．７ｍｍｏｌ／Ｌ为糖尿病模型建立。将２０只糖尿病大 鼠随机分为模型对照组和甘草酸治疗组，每组ｌ０ 只，各组间血糖值无差异。每日灌胃给药，甘草酸 组３０ｍｇ／ｋｇ／ｄ．模型对照组和正常对照组用等容量 生理盐水１ｍｌ／１００ｇ／ｄ，共１６周。 １．４标本收集 实验结束前ｌｄ用代谢笼收集２４ｈ尿液，离 心，测２４ ｈ尿蛋白（ＵＰ ２４ｈ）。各组大鼠禁食不禁 水，１２ｈ后以１０％水合氯醛４００ｍｇ／ｋｇ腹腔注射麻 醉，下腔静脉取血，测空腹血糖（ＦＢＧ）、血清尿素 氮（ＢＵＮ）、血肌酐（ＳＣｒ）、血清超氧化物歧化酶 （ＳＯＤ）活性和丙二醛（ＭＤＡ）含量。用预冷生理盐 水灌洗肾脏，去除被膜，滤纸吸干血迹后称重， 切取ｌｃｍ 肾皮质放人液氮中速冻后转移到一８０℃ 保存，待测肾组织ＡＲ活性及其基因表达。 １．５肾功能相关指标的检测 计算肾脏肥大指数（肾重／体重，ＫＷ／ＢＷ）；用 葡萄糖氧化酶法检测血糖；ＵＰ２４ｈ测定用免疫比 ｏｕｒｎ ｏｆＣｈｉｎｎ一坪∞ｎ ｅｎ＆ｈｉｐ Ｈｏｓｐｉｔ ，２Ｄ』２ Ａｐｒ， 。ｚ．２６， ．２ 浊法；血清ＢＵＮ、Ｓｃｒ用日本Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ２７００全 自动生化分析仪测定 １．６血清ＳＯＤ、ＭＤＡ检测 用黄嘌呤氧化酶法检测血清中ＳＯＤ活性： 硫代巴比妥酸法（ＴＢＡ）检测血清中ＭＤＡ含量 检 测用试剂盒由南京建成生物工程研究所提供．． １．７ 肾脏ＡＲ的活性与基因表达检测 １．７．１ 肾脏ＡＲ活性检测 参照刘长山等［２］的方法测定，取８０～１００ｍｇ冷 冻的肾脏皮质部分组织，按１：５（Ｗ／Ｖ）加入预冷 的０．９％生理盐水，匀浆后低温离心机１００００ｇ离 心２ｈ，吸取上清液待测。整个标本处理过程均在 ４℃进行。 反应体系为３ｍｌ，包括６７ｍｍｏ１／Ｌ ｐＨ６．２的 Ｎａ＋－Ｋ 磷酸缓冲液１．２ｍｌ，１０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＤＬ一甘油 醛０．３ｍｌ，１００ｍｍｏｌ／Ｌ的硫酸氨０．９ｍｌ，０．１ｍｍｏｌ／Ｌ 的还原型辅酶ＩＩ（ＮＡＤＰＨ）０．３ｍｌ，酶及组织上清液 ０．３ｍｌ。对照杯以双蒸水代替底物ＤＬ一甘油醛。 反应白加入ＮＡＤＰＨ开始．３７ 反应４ｒａｉｎ，用 ＵＶ２６０型分光光度仪记录ＮＡＤＰＨ在３４０ｎｍ波 长处吸光度（ＯＤ）值，连续记录３ｍｉｎ，ＯＤ值的下 降表示ＡＲ活性，ＡＲ单位定义为每毫克蛋白质每 分钟消耗１Ｉｘｍｏｌ ＮＡＤＰＨ（Ｉｘｍｏｌ／ｍｇ／ｍｉｎ）。 １．７．２ ｌｉＴ—ＰＣＲ法检测ＡＲ ｍＲＮＡ表达 用ＴＲ Ｉｚｏ ｌ试剂（美国ｌｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）按说 明书提取肾皮质样本的总ＲＮＡ，１％琼脂糖凝胶 （含０．１ｔｘｇ／ｍｌ核酸染料）电泳鉴定ＲＮＡ完整性； ＲＴ—ＰＣＲ试剂盒（日本ＴａＫａＲａ公司）进行逆转录 和ＰＣＲ扩增反应．ＡＲ引物序列：上游引物５’一 ＡＣＴＧＣＣＡＴＦＧＣＡＡＧＧＣＡＴＣＧＴＧＧＴ一３’下游引物 ５’一ＣＣＣＣＣＡＴＡＧＣＡＣＴＧＧＡＧ Ｉ ＣＴＡＧＣ一３’ 。Ｂ— ａｃｔｉｎ引物序列：上游引物５ 一ＡＡＣＡＣＣＣＣＡ ＣＣ ＣＡＴＧＴＡＣＧ一３ ，下游引物５ 一ＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣ— ＧＡ１］［１ｒＩ１ＣＣＣ一３ ［４１．均由上海生工生物工程公司合 成。ＰＣＲ扩增及定量分析：扩增条件为ｃＤＮＡ ｌＩｘｌ，Ｔａｑ聚合酶８０ｕ，１０ｘＰＣＲ２．５ ｌ，ｄＮＴＰ １ ｌ，引 物２００ｎｍｏｌ／Ｌ，补双蒸水至２５１ｘ１。９４０Ｃ预变性 ３ｒａｉｎ，９４℃变性３０ｓ，５９ｅ（二退火３０ｓ，７２ｃＣ延伸３０ｓ， 最后７２。【＝延伸３ｒａｉｎ。ＡＲ扩增３０个循环，Ｂ—ａｃｔｉｎ 扩增２４个循环。ＰＣＲ产物和１３－ａｃｔｉｎ分别取５ｔｘｌ 上样，以１％琼脂糖电泳（８０Ｖ，２０ｒａｉｎ）。电泳结果以 ＵＶＰ３０００照相，并用一维凝胶分析软件进行分 析 中日友好医院学报２０１２年第２６卷第２期Ｊｏｕｒｎ （ｆＣｈｉｎⅡ一却Ⅱｎ ｎ ｎ＆ｈｉ，ｐ Ｈｏｓｐｉ ，２０１２ Ａｐｒ， 。ｆ．２６，，ｖｏ．２ ９５ 组别 ｎ ＢＵＮ（ｒｅｏｏｌｔ／Ｌ） Ｃｒ（Ｉｘｍｏｌ／Ｌ） 肾指数 ＵＰ２４（ｍｇ） ＳＯＤ（Ｕ／ｍ１） ＭＤＡ（ｎｍｏｌ／ｍ１） 注：与正常对照组比较，”Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ， Ｐ＜０．０５；与糖尿病模型组比较， 艮Ｏ．０１， Ｐ＜Ｏ．０５。 １．８ 统计学方法 表３大鼠ＡＲ活性及ｍＲＮＡ表达水平比较（ 蝴） 应用ＳＰＳＳ１１．５统计软件包处理数据。组问的 比较采用ｔ检验和单因素方差分析。 ２ 结果 ２．１大鼠体重和血糖比较 实验期间因１只大鼠死亡，共２９只大鼠完成 注：与正常对照组比较， Ｐ＜Ｏ．０５， Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ； 与糖尿病组比较 Ｐ＜Ｏ．０ｌ。 实验，正常对照组１０只、模型对照组９只、甘草 酸治疗组ｌ０只。实验前各组大鼠体重无明显差异 （Ｐ＞０．０５），说明分组较均衡，血糖均显著高于正常 对照组（ ０．Ｏ１）。表１示，实验结束后模型对照 ０．Ｏ１），二者比较无显著性差异。 ２．５ 大鼠肾脏ＡＲ活性及ｍＲＮＡ表达水平比较 表３示，糖尿病模型组与正常对照组相比．肾 组织ＡＲ活性及其ｍＲＮＡ的表达明显增强（Ｐ＜ ０．０１），甘草酸组与模型组相比能够明显降低肾组 织ＡＲ活性，下调ＡＲ ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＜０．０１）。见 图１ 组、甘草酸治疗组体重均显著低于正常对照组（均 Ｐ＜Ｏ．０１），２组间体重无显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５）．血 糖与治疗前比较无显著差异（ ０．０５） ２．２大鼠肾功能指标比较 表２示，糖尿病模型组与正常组相比，血清尿 素氮、血肌酐显著升高（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１），经甘草酸治疗 １６周后，血清尿素氮、血肌酐水平显著降低（尸＜ ０．Ｏ１）。 ２．３肾脏指数及２４ｈ尿蛋白的变化 １伽慢 表２示，糖尿病模型组与正常对照组相比．肾 脏肥大指数、ＵＰ２４ｈ均显著升高（均Ｐ＜Ｏ．０１） 与 模型组相比，甘草酸能显著改善肾脏肥大指数．降 低ＵＰ２４ｈ（Ｐ＜０．叭） ２．４大鼠血清氧化应激状况比较 黜 ａＯ恤ｐ ２ＯＯｂｐ ＡＲ嫱７ｏｔｏ）ｔ ａｃｔｉｎ《２２８ｂｐ） 首蕈酸燧桴ｌ麓媳惩常组 表２示，与正常对照组比较，糖尿病各组大鼠 血清ＭＤＡ水平显著升高（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１），ＳＯＤ降低（Ｐ＜ ０．０１）；甘草酸治疗组与糖尿病模型组比较．血清 ＭＤＡ水平显著降低（Ｐ＜Ｏ．０５），ＳＯＤ显著升高（Ｊｐ＜ 图１半定量ＲＴ—ＰＣＲ测定各组ＡＲｍＲＮＡ表达 ３讨论 ＤＮ的具体发病机制仍然不是很清楚，近年 来的研究热点又转移到了多元醇通路激活所致醛 ９６ 中日友好医院学报２Ｏｌ２年第２６卷第２期］糖还原酶活性增高与氧化应激的关系上 醛糖还 原酶（ＡＲ）是多元醇通路中的重要限速酶，持续 高血糖状态下，ＡＲ活性增强，葡萄糖在ＡＲ的催 化下还原为山梨醇，后者在山梨醇脱氢酶（ＳＤＨ） 作用下转化成果糖，山梨醇具有很强的渗透性． 其在细胞内的积聚可以造成细胞渗透性水肿和肾 小管重吸收功能障碍；另外，山梨醇在细胞内积 聚可诱导氧化应激，干扰一氧化氮生物利用，促进 前列腺素／血栓烷释放，影响动脉血管收缩．从而 促进糖尿病微血管病变的发生Ｉ ５ｌ。上述过程中 ＮＡＤＰＨ消耗增加，使还原型谷胱甘肽生成减少， 自由基清除减少，引起细胞氧化应激损伤ｌ６ｌ７】 另 外，醛糖还原酶活性增强可通过ＰＫＣ、ＭＡＰＫ、ＮＦ— ＫＢ（ｐ６５）等途径引起氧化应激反应性级联信号放 大，从而使肾小球基底膜的增厚及肾小球系膜细 胞、细胞外基质积聚，肾脏结构和功能改变．促进 了ＤＮ的形成ｌ８１。体外应用醛糖还原酶干扰ＲＮＡ 以及醛糖还原酶抑制剂可抑制氧化应激活性氧水 平及ＮＦ—ＫＢ活性¨圳。本实验中我们发现．糖尿病模 型组大鼠喂养１６周后，血清抗氧化酶ＳＯＤ活性 低下，脂质过氧化代谢产物ＭＤＡ含量增加、ＡＲ 活性与基因表达水平明显升高，同时反映糖尿病 早期 肾损害的指标ＵＰ２４及肾指数升高．肾功能 相关指标血清尿素氮及血肌酐亦显著升高，肾功 能明显受损，说明多元醇通路过度激活。氧化应激 增强与ＤＮ的发生发展密切相关 甘草酸（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ，ＧＬ）是甘草中最主要的 活性物质，有研究资料表明，甘草及其有效成分能 抑制糖尿病大鼠醛糖还原酶活性，降低红细胞中 山梨醇．还具有抗炎症、抗氧化和抑制血小板聚集 等作用Ｉ１０１。本实验中我们对糖尿病肾损伤大鼠应 用甘草酸治疗后，糖尿病大鼠肾功能明显改善，血 清ＳＯＤ活性增强同时ＭＤＡ含量减少、肾脏ＡＲ 活性及其ｍＲＮＡ表达水平均降低。因此，我们认 为甘草酸可能通过提高机体抗氧化能力、减少肾 脏ＡＲ活性及其基因表达以抑制多元醇通路的过 度激活来发挥其肾功能保护作用，预防ＤＮ的发 生。本研究只选取了治疗ｌ６周这一点的结果，甘 草酸具体的起效时间、其对ＤＮ病情发展的作用 以及如何调节肾脏ＡＲ相关信号转导途径的机制 ｏｕｒｎ ｏｆＣｈｉｎ『卜却∞ｎ ｎ 蚋，Ｈｏｓｐ ，２Ｄ ２ ｐｒ， 。２．２６，，ｖｏ．２ 等问题有待进一步研究 ４参考文献 ［１ Ｊ ＤＣＣＴ：Ｔｈｅ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ＣｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎＳ Ｔｒｉａｌ Ｒｅ— ｓｅａｒｃｈ Ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｌｏｎｇ——ｔｅｒｍ ｅｏｍｐｌｉｅａ— ｔｉｏｎｓ ｉｎ ｉｎｓｕｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ［Ｊ１．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ＋１９９３，３２９：９７７—９８６． ［２Ｊ刘长山，陈慧黎，查锡良，等．醛糖还原酶的分离纯化和性质 分析［ＪＪ．上海医科大学学报，１９９６，２３（６）：４２８—４３０． ［３ Ｊ ＬＩＵ Ｗｅｉ—ｈｕａ，ＨＥＩ Ｚｉ—ｑｉｎｇ，ＮＩＥ Ｈｕｎｇ，ｅｔ ａ１．Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ａＢｅ— ｌｉｏｒａｔｅｓ ｒｅｎａｌ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ ｂｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｂｏｔｈ ｎｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ａｌｄｏｓｅ ｒｅｄｕｅｔａｓｅ 【Ｊ１．Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ Ｊ，２００８，１２Ｉ（８）：７０６—７１２． ［４］于德民，刘德敏，刘小慧，等．醛糖还原酶抑制剂对大鼠肾脏 醛糖还原酶基因表达的影响【ＪＩ．天津医科大学学报，２００５，１ｌ （４）：５１９—５２１． 【５］Ｔｏｔｈ Ｅ，Ｒａｃｚ Ａ，Ｔｏｔｈ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｔｉｒｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｏｌ ｐａｔｈｗａｙ ｔｏ ａｒｔｅｒｉｏｌａｒ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ，ｒｅｄｕｃｅｄ ＮＯ，ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｄ ＰＧＨ（２）／ＴＸＡ（２）ｍｅｄｉａ— ｔｉｏｎ【Ｊ１．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｅ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００７，２９３（５）： Ｈ３０９６—３ １０４． ［６】Ｐｒｉｃｅ ＳＡ，Ａｇｔｈｏｎｇ Ｓ，Ｍｉｄｄｌｅｍａｓ ＡＢ，ｅｔ ａ１．Ｍｉｔｏｇｅｎ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｐ３８ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｒｅｄｕｃｅｄ ｎｅｒｖｅ ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ ｖｅ— ｌｏｃｉｔｙ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ ｉｎ ｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ａｌｄｏｓｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００４，５３（７）：１８５１－１８５６． ［７］ Ｆｏｌｌｉ Ｆ，Ｃｏｒｒａｄｉ Ｄ，Ｆａｎｔｉ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ｍｉｃｒｏ－ａｎｄ ｍａｅｒｏｖａｓｅｕｌａｒ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：ａｖｅｎｕｅｓ ｆｏｒ ａ ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ— ｂａｓｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ『Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｖ，２０１１，７ （５）：３１３－３２４． ［８］Ｍａｎｎａ Ｐ，Ｓｉｎｈａ Ｍ，Ｓｉｌ ＰＣ．Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ｒｏｔｅ ｏｆ ａｒｊｕｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｎａｌ ｉｎｊｕｒｙ： ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｏｌ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃａｓｃａｄｅｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔ，２００９，ｌ８１（３）：２９７— ３０８． ［９］ Ｎａｍｂｕ Ｈ，Ｋｕｂｏ Ｅ，Ｔａｋａｍｕｒａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｄｏｓｅ ｒｅｄｕｅｔａｓｅ ｇｅｎｅ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｈｉｇｈ—ｇｌｕｃｏｓｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｒａｔ ｌｅｎｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ Ｉｊ１．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ，２００８，８２（１）：ｌ８—２４． ［１０】Ｍａｃ Ｔ，Ｋｉｓｈｉｄａ Ｈ，Ｎｉｓｈｉｙａｍａ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ａ ｌｉｃｏｒｉｃｅ ｅｔｈａｎｏｌｉｃ ｅｘｔｒａｃｔ ｗｉｔｈ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ— ｇａｍｍａ ｌｉｇａｎｄ——ｂｉｎｄｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｆｆｅｃｔｓ ｄｉａｂｅｔｅｓｉｎ ＫＫ—・Ａｙ ｍｉｃｅ，ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｏｂｅｓｉｔｙ ｉｎ ｄｉｅｔ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｂｅｓｅ Ｃ５７ＢＬ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｉｎ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔｓ 【Ｊ１．Ｊ Ｎｕｔｒ，２００３，１３３（１１）：３３６９—３３７７．
