凯基BCA蛋白含量检测试剂盒
Cat Number：KGET13 For Research Use Only
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一、 试剂盒说明
BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。 二、 试剂盒组份
组 份
Cat: KGPBCA试 （100 assay酶标板/20assay 1mL比色杯）
蛋白标准溶液（0. 5 μg/μL ）
BCA试剂A BCA试剂B
三、 操作步骤 A． 酶标板操作
1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂
孔号
蛋白标准溶液（μL） 去离子水（μL） 对应蛋白含量（μg）
0 0 20 0
1 1 19 0.5
2 2 18 1.0
3 4 16 2.0
4 8 12 4.0
5 12 8 6.0
6 16 4 8.0
7 20 0 10.0
2 mL 20 mL 0.4mL
Cat: KGPBCA （250 assay酶标板
/50assay 1mL比色杯）
5 mL 25 mL×2 1mL
2. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分
混匀；
3. 各孔加入200μL BCA工作液；
4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量（μg）
为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；
5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37
℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；
6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20
μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。
B． 分光光度计测定
1.
标准曲线的绘制：各管按照下表加入试剂 孔号
蛋白标准溶液（μL） 去离子水（μL） 对应蛋白含量（μg） 2. 3.
0 0 1000
1 5 95 2.5
2 10 90 5.0
3 20 80 10.0
4 40 60 20.0
5 60 40 30.0
6 80 20
7 100 0
40.0 50.0
根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；
各管加入1000μL BCA工作液；
4. 5. 6.
各管充分混匀，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；
稀释待测样品至合适浓度，样品稀释液总体积为100μL，加入BCA工作液1000μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；
根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（100μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。
四、 注意事项
1. 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 加入BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。
3. 待测样品浓度在50～2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
4. BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM.不适用BCA法时建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
5. 操作时要带手套。
五、 凯基相关产品 （详见凯基网站http://www.keygentec.com.cn）
1、 蛋白提取
核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 全蛋白提取试剂盒
膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 线粒体蛋白提取试剂盒
磷酸化蛋白提取试剂盒（简易型） 2、 蛋白定量
BCA法蛋白定量检测试剂盒 Bradford法蛋白定量检测试剂盒 Lowry法蛋白定量检测试剂盒 3、 蛋白染色
蛋白质银染检测试剂盒
蛋白质考马斯亮蓝染色检测试剂盒 考马斯亮蓝蛋白快速染液 4、 蛋白分子量Marker
蛋白分子量Marker（14KD-116KD） 蛋白分子量Marker（10KD-200KD） 预染蛋白分子量Marker（20KD-118KD） 预染彩色蛋白分子量Marker（11KD-250KD） 5、 Western bloting组装试剂盒
凯基蛋白提取和SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒 凯基Western bloting检测试剂盒 6、 Western bloting化学发光试剂盒
ECL检测试剂盒 加强型ECL检测试剂盒
