花色苷测定

（1）缓冲液的制备：

pH1.0缓冲液：使用电子分析天平准确称量1.86g氯化钾，加蒸馏水约980ml，用盐酸和酸度计调至pH1.0，再用蒸馏水定容至1000ml。

pH4.5缓冲液：使用电子分析天平准确称量32.81g无水醋酸钠，加蒸馏水约980ml，用盐酸和酸度计调至pH4.5，再用蒸馏水定容至1000ml。

（2）花色苷含量的测定：

采用pH示差法[33]：用pH1.0、 pH4.5的缓冲液，将样液稀释到适当的倍数,放在暗处，平衡15min。用光路直径为1cm的比色皿在可见分光光度计的510nm和700nm处，分别测定吸光度，以蒸馏水做空白对照。按下式计算花色苷的含量。

A=[ ( A510 - A700 ) pH1.0 - ( A510 - A700) pH4.5]

花色苷浓度C ( mg/L ) = A×MW×DF×1000 /(ε×l)

两式中：

( A510 - A700 ) pH1.0—加pH1.0缓冲液的样液在510 nm和700 nm波长下的吸光值之差；

( A510 - A700) pH4.5—加pH4.5缓冲液的样液在510 nm和700 nm波长下的吸光值之

差；

MW=449.2（矢车菊—3—葡萄糖苷的分子量，mg/mol）；

DF=样液稀释的倍数；

ε=26900（矢车菊—3—葡萄糖苷的摩尔消光系数，mol-1）；

l=比色皿的光路直径，为1cm。