多肽问题汇总解答回复

有网友碰到这样的问题“多肽问题汇总解答回复”。小编为您整理了以下解决方案，希望对您有帮助：

解决方案1：

多肽问题汇总解答

专肽生物如何对合成的多肽进行质检？

答案：专肽生物对所有合成肽均进行HPLC（高效液相色谱）和MS（质谱）分析，并提供相应的检测报告。采用反相色谱法纯化多肽，通过质谱法测定肽的分子量以确认产品正确性，MS检测结果还能显示大部分主要杂质。所有交付的肽均达到客户要求的纯度，未达到纯度要求的多肽会被丢弃，但如有需要，也可提供给客户。

如何解释MALDI(MS)中的P+Na和P+K峰？

答案：MALDI质谱中经常出现的Na峰和K峰来源于溶剂水中的痕量钠离子和钾离子，这些离子无法完全去除，会在质谱分析时离子化并与肽的自由羧基结合。因此，MALDI MS图谱中出现钠峰和钾峰是不可避免的。

为什么要进行N端乙酰化，C端酰胺化修饰？

答案：这些修饰可以保护肽不被降解，同时模拟肽在母本蛋白中α氨基和羧基的原始状态，避免引入多余电荷，防止外切酶作用，使肽更加稳定。

如何将多肽溶解在DMSO中？

答案：疏水性多肽可以较容易地溶解在DMSO（二甲基亚砜）中。但需注意DMSO对细胞的毒性作用，高浓度DMSO不可应用于细胞培养中。对于疏水性非常高的多肽，可先尝试将其溶解在少量DMSO中，然后慢慢添加到不断搅拌的水溶液（如PBS）中，直至理想浓度。超声波有助于多肽溶解。细胞培养中DMSO的终浓度一般推荐为0.5%，部分细胞可容忍1%而不表现出严重毒性，但原代细胞更敏感，浓度应低于0.1%。

磷酸化修饰多肽的设计有什么建议？

答案：建议磷酸化的氨基酸以后的残基不要超过10个，即从N端往C端数，磷酸化氨基酸之前的氨基酸残基最好不要超过10个，以提高偶联效率。

如何选择多肽N端修饰和C端修饰？

答案：肽的末端默认为N端游离的氨基，C端游离的羧基。为了与母本蛋白更为接近，通常选择N端乙酰化，C端酰胺化修饰，以避免引入多余电荷，防止外切酶作用，使肽更加稳定。

我需要合一条环肽，其中含有一个色氨酸，它会被氧化吗？

答案：色氨酸的氧化是肽氧化中的常见现象。环肽一般是先环化再纯化，如果色氨酸发生氧化，肽在HPLC柱上的滞留时间会发生变化，因此被氧化的肽可以通过纯化去除。另外，氧化的肽也可以通过MS检测到。

如何确定肽已成环？

答案：一般采用Ellman反应来检测成环反应是否完全。如果检测结果为阳性（黄色），说明成环反应不完全；如果检测结果为阴性（不是黄色），说明成环反应已进行完全。

含有Cys的多肽在出货前经过还原了吗？

答案：如果没有发现肽已经被氧化，一般不对Cys进行还原。多肽在pH 2条件下纯化、冻干，这样的条件至少在一定程度上防止了Cys的氧化。含Cys的肽在pH 2条件下纯化，除非有特殊原因需要在pH 6.件下纯化。如果纯化在pH 6.8进行，纯化产物必须马上用酸处理以防氧化。在最后的质量控制环节，如果MS图谱上发现有分子量为(2P+H)的物质存在，说明Cys已经氧化形成二聚体。

荧光标记时，肽和修饰标记的染料之间需要加一个间隔吗？

答案：为了避免多肽与荧光标签之间发生相互作用，维持蛋白的构象及其生物学活性，推荐引入一个可弯曲的间隔区，如Ahx（含有6碳分子的环状结构）。荧光染料既可以标记在蛋白的氨基端也可以标记在蛋白的羧基端，但为了便捷高效地合成多肽，推荐选择标记在氨基端。

多肽一般有哪几种盐的形式？通过什么方式转盐或脱盐？

答案：多肽以TFA盐的形式最多，其次有醋酸盐及盐酸盐等形式。转盐方式多为离子交换法和HPLC法，脱盐可用G25柱。醋酸盐及盐酸盐的价格比TFA的价格高出20%-30%。

在多肽检测过程中经常出现基线漂移的原因是什么？怎么解决？

答案：固定三氟乙酸(TFA)浓度的梯度洗脱有时会在210-220nm检测处造成吸收基线的漂移。降低或消除基线漂移需要尽量使检测波长靠近215nm，并在溶剂B中比在溶剂A中少加15%的三氟乙酸进行补偿。

影响多肽纯度检测结果的因素有哪些？

答案：影响多肽纯度检测结果的因素主要包括流动相体系、色谱柱型号、柱温、波长及色谱仪的性能指标。每一项不同都可能造成结果产生误差。

有哪些流动相体系或离子对试剂可用于多肽的分离纯化？

答案：最常用的离子对试剂是三氟乙酸(TFA)，能调节洗脱液的PH，同时作为离子对试剂与多肽相互作用，增强分离效果。其它可用于多肽分离纯化的流动相体系或离子对试剂包括醋酸体系、磷酸体系、盐酸体系、七氟丁酸等，通过适当调节PH都能取得很好的分离效果。